期刊简介
本刊为国内外发行的神经外科专业学术期刊，该杂志由第四军医大学主办，办刊宗旨为：贯彻党和国家卫生工作方针及政策，坚持理论与实践、普及与提高相结合的方式，反映我国及世界神经外科学的基础研究和临床技术的重大进展，促进国内、外神经外科学的学术交流。本刊主要涉及神经外科各类疾病的病因及病理、诊断与治疗方面，同时兼顾头颈外科、颌面外科、耳鼻咽喉科、神经影像学等学科的内容。本杂志为国际标准大16开本，105g进口铜版纸印刷，栏目设有述评、专家论坛、论著、论著摘要、经验交流、技术改进、短篇与个案、会议纪要、专题笔谈、讲座、综述、学术动态及教学园地等。
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- 杂志名称：中华神经外科疾病研究杂志
- 主管单位：第四军医大学
- 主办单位：第四军医大学第一附属医院
- 国际刊号：1671-2897
- 国内刊号：61-1384/R
- 出版周期：双月刊
期刊荣誉：中国核心期刊遴选数据库期刊收录：国家图书馆馆藏, 统计源核心期刊(中国科技论文核心期刊), 知网收录(中), CA 化学文摘(美), 万方收录(中), 上海图书馆馆藏, 维普收录(中)
基于GatewayTM系统Dec1慢病毒表达载体的构建
李晓明；林伟；章翔；王江；张璟；张健；韩腾龙；药立波
关键词：分化型胚胎软骨发育基因1, GatewayTM系统, 慢病毒表达载体, 神经胶质瘤
摘要：目的 利用GatewayTM技术构建分化型胚胎软骨发育基因1(Dec1)的慢病毒表达载体并建立稳定表达该目的基因的人胶质瘤U87细胞株.方法 从人脑胶质瘤组织中提取总RNA,经反转录得到目的cDNA.设计含有特异性酶切位点的引物,通过逆转录酶-多聚酶链反应(RT-PCR),获得用于重组的Dec1目的基因全长.将目的片段克隆至入门载体(pENTRTM 3C)中产生入门克隆.利用GatewayTM技术,将入门克隆中的目的片段转接于目的载体(pLenti6.3/V5-DEST)中产生表达克隆pLenti6.3-Dec1.在293T细胞中包装慢病毒表达载体pLenti6.3-Dec1并转染U87细胞,通过灭瘟素筛选、Western blot鉴定,获得稳定表达Dec1的U87细胞株.结果 Dec1基因全长的获取与慢病毒表达载体pLenti6.3-Dec1的构建经PCR和测序得到证实.用pLenti6.3-Dec1转染U87细胞后,通过灭瘟素筛选,获得稳定表达Dec1的U87细胞株.结论 成功构建了pLenti6.3-Dec1慢病毒表达载体并建立稳定表达Dec1的人胶质瘤U87细胞株,为深入研究Dec1分子机制奠定了基础.
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