期刊简介
本刊为国内外发行的神经外科专业学术期刊，该杂志由第四军医大学主办，办刊宗旨为：贯彻党和国家卫生工作方针及政策，坚持理论与实践、普及与提高相结合的方式，反映我国及世界神经外科学的基础研究和临床技术的重大进展，促进国内、外神经外科学的学术交流。本刊主要涉及神经外科各类疾病的病因及病理、诊断与治疗方面，同时兼顾头颈外科、颌面外科、耳鼻咽喉科、神经影像学等学科的内容。本杂志为国际标准大16开本，105g进口铜版纸印刷，栏目设有述评、专家论坛、论著、论著摘要、经验交流、技术改进、短篇与个案、会议纪要、专题笔谈、讲座、综述、学术动态及教学园地等。
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- 杂志名称：中华神经外科疾病研究杂志
- 主管单位：第四军医大学
- 主办单位：第四军医大学第一附属医院
- 国际刊号：1671-2897
- 国内刊号：61-1384/R
- 出版周期：双月刊
期刊荣誉：中国核心期刊遴选数据库期刊收录：国家图书馆馆藏, 统计源核心期刊(中国科技论文核心期刊), 知网收录(中), CA 化学文摘(美), 万方收录(中), 上海图书馆馆藏, 维普收录(中)
PTEN基因亚克隆和pTRE-PTEN反应质粒构建
黄安炀；章翔；陈长春；李霞；刘新平
关键词：PTEN, 基因克隆, 真核表达载体
摘要：目的亚克隆野生型与张力蛋白在10号染色体同源缺失的磷酸酶(PTEN)基因,构建四环素反应性元件调控的与张力蛋白在10号染色体同源缺失的磷酸酶反应质粒(pTRE-PTEN).方法以pBP-PTEN质粒为模板, 应用pfuDNA聚合酶,多聚酶链反应法(PCR)扩增PTENcDNA.将扩增的PTENcDNA与三磷酸脱氧腺苷(dATP)反应,然后将产物与pGEM-T-Easy载体直接连接;连接产物转化大肠杆菌DH5 α,蓝白筛选,挑选白色克隆作鉴定测序.将测序正确的pGEM-T-Easy/PTEN和带潮霉素筛选标记的四环素反应性元件质粒(pTRE2Hyg)分别双酶切,前者回收1.2 kb的PTEN片段,后者回收线性化的pTRE2Hyg片段,将两者连接成pTRE-PTEN表达重组体,转化大肠杆菌DH5α,抽提重组体质粒,经NotⅠ和SalⅠ酶切鉴定阳性克隆含有大小约6.4 kb和1.2 kb的两条带.结果成功地从pBP-PTEN质粒中亚克隆人PTENcDNA,并构建了pTRE-PTEN反应质粒.结论 pTRE-PTEN反应质粒的构建为建立pTet-on-PTEN-U87MG细胞系奠定基础.
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